項目簡介

　　色譜分析法(Chromatography)簡稱色譜法或層析法，是一種物理或物理化學分離分析方法，該法利用某一特定的色譜系統(tǒng)(薄層色譜、高效液相色譜或氣相色譜等系統(tǒng))進行混合物中各組分的分離分析，主要用于分析多組分樣品。

常見項目

　　氣相色譜(GC)：以氣體作為流動相的色譜設備，適合檢測無機氣體和小分子量有機物。

　　高效液相色譜(HPLC)：以流動相淋洗固定性實現(xiàn)有機物的分離。流動相一般為，水，乙腈，甲醇等。適用于有機物的分離與檢測。

　　凝膠滲透色譜(GPC)：凝膠具有化學惰性，它不具有吸附、分配和離子交換作用。讓被測量的高聚物溶液通過一根內裝不同孔徑的色譜柱，柱中可供分子通行的路徑有粒子間的間隙(較大)和粒子內的通孔(較小)。當聚合物溶液流經色譜柱(凝膠顆粒)時，較大的分子(體積大于凝膠孔隙)被排除在粒子的小孔之外，只能從粒子間的間隙通過，速率較快;而較小的分子可以進入粒子中的小孔，通過的速率要慢得多;中等體積的分子可以滲入較大的孔隙中，但受到較小孔隙的排阻。介乎上述兩種情況之間。經過一定長度的色譜柱，分子根據(jù)相對分子質量被分開，相對分子質量大的在前面(即淋洗時間短)，相對分子質量小的在后面(即淋洗時間長)。自試樣進柱到被淋洗出來，所接受到的淋出液總體積稱為該試樣的淋出體積。當儀器和實驗條件確定后，溶質的淋出體積與其分子量有關，分子量愈大，其淋出體積愈小。

　　高溫凝膠滲透色譜(高溫GPC)：適用于常溫難以溶解的樣品，例如超高分子量的聚乙烯。

結果展示

常見問題

　　1. 氣相色譜法的一些常用術語及基本概念解釋??

　　(1)相、固定相、流動相：一個體系中的某一均勻部分稱為相;在色譜分離過程中，固定不動的一相稱為固定相;通過或沿著固定相移動的流體稱為流動相;

　　(2)色譜峰：物質通過色譜柱進到鑒定器后，記錄器上出現(xiàn)的一個個曲線稱為色譜峰;

　　(3)基線：在色譜操作條件下，沒有被測組分通過鑒定器時，記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線;

　　(4)峰高與半峰寬：由色譜峰的濃度極大點向時間座標引垂線與基線相交點間的高度稱為峰高，一般以h表示。色譜峰高一半處的寬為半峰寬，一般以×1/2表示;

　　(5)峰面積：流出曲線(色譜峰)與基線構成之面積稱峰面積，用A表示;

　　(6)死時間、保留時間及校正保留時間：從進樣到惰性氣體峰出現(xiàn)極大值的時間稱為死時間，以td表示。從進樣到出現(xiàn)色譜峰最高值所需的時間稱保留時間，以tr表示。保留時間與死時間之差稱校正保留時間，以Vd表示;

　　(7)死體積，保留體積與校正保留體積：死時間與載氣平均流速的乘積稱為死體積，以Vd表示，載氣平均流速以Fc表示，Vd=tdxFc。保留時間與載氣平均流速的乘積稱保留體積，以Vr表示，Vr=trxFc;

　　(8)儀器噪音：基線的不穩(wěn)定程度稱噪音;

　　2. 氣相色譜分析中柱長、柱內徑、柱溫、載氣流速、固定相、進樣等操作條件對分離的影響?

　　(1)柱長、柱內徑：柱管增長，可改善分離能力，短則組分留出的快些;柱內徑小分離效果好，柱內徑大處理量大，但柱內徑過大，將導致單體不能均勻地分布在色譜柱中，一般柱內徑3-6mm，柱長1-4m;

　　(2)柱溫：影響分離效能和分析速度，選擇柱溫是根據(jù)混合物的沸點范圍，固定液的配比和鑒定器的靈敏度。提高柱溫可縮短分析時間;降低柱溫可使色譜柱選擇性大，有利于組分的分離和色譜柱穩(wěn)定性提高，延長柱壽命。一般采用等于或高于數(shù)十度于樣品的平均沸點的柱溫比較合適，對易揮發(fā)樣用低柱溫，不易揮發(fā)采用高柱溫;

　　(3)載氣流速：一般流速高，色譜峰窄;反之則寬些，但不宜過高或過低。要求平穩(wěn)，一般流速在10-100ml/min之間;

　　(4) 固定相(固體吸附劑+涂有固定液的擔體)：固定相粗細(一般40-60、60-80、80-100目，對于同等長度的柱子，顆粒細的分離效率更高);固定液含量(它與擔體的重量比一般15-25%，過大影響分離，過小使色譜峰拖尾);

　　(5) 進樣：一般進樣快，進樣量小，進樣溫度高，分離效果好;常規(guī)液體1-20μl，氣體0.1-5ml;

　　3. 高效液相色譜(HPLC)拖尾峰可能是什么原因導致的?

　　(1) 篩板阻塞：柱子兩頭的過濾篩板如果堵塞，樣品就會在篩板部分受阻而形成時間延遲，使得樣品在柱后流出時峰型形成拖尾。需要通過反沖色譜柱，或者更換篩板;

　　(2)色譜柱塌陷：是指色譜柱由于其它原因引起了柱效率喪失，不能對物質形成保留，使得物質不在固定相上保留而隨流動相流出，但是又還有一點柱效，因此形成拖尾。需要重新填充色譜柱或者更換色譜柱;

　　(3) 有污染：即樣品不在同一起跑線起跑，從后面開始跑得到達終點稍晚，表現(xiàn)出拖尾。更換色譜柱或者采用有機溶劑梯度洗脫1h以上，以沖洗柱子;

　　(4) 流動相PH值選擇錯誤：如某PH下有的樣品存在分子型和離子型的動態(tài)平衡，離子型的陸續(xù)向分子型轉化就會表現(xiàn)出拖尾。調節(jié)PH值可抑制分子解離，改善拖尾，對于堿性化合物，相對較低的PH值更有利于得到對稱峰;

　　4. GPC測試出來的分子量和理論得分子量偏差很大，為什么?

　　GPC測得的是相對分子量，分子量結果對標樣有很大依賴性，每種流動相都有對應的一種標準物質作出的標準曲線，樣品測試結果要跟標曲比較，然后得出相對分子量，跟理論結果會有偏差屬于正常的。

　　5. GPC水相測試的話，流動相可以是硝酸鈉溶液么?測試的設備型號以及條件是什么呢?

　　流動相：0.2M NaNO3+0.01M NaH2PO4 PH=7;

　　水相GPC 一般都是水+緩沖液配備的流動相;

　　儀器：waters1525 檢測器：waters1424

　　流速：1ml/min 溫度：35℃

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